Solarbio ELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術。將抗小鼠TNF-α單克隆抗體包被在酶標板上；分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本，標準品和樣本中的小鼠TNF-α會與酶標板上的包被抗體充分結合；洗板后加入生物素化抗小鼠TNF-α抗體，該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標準品和樣本中的小鼠TNF-α發(fā)生特異性結合；洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強度的非共價結合；洗板后加入顯色劑底物TMB，若反應孔中樣品存在不同濃度的小鼠TNF-α，則HRP會使無色TMB變成不同深淺（正相關）的藍色物質，加入終止液后反應孔會變成黃色；最后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定反應孔樣品吸光度（OD），樣本中的小鼠TNF-α濃度與OD成正比，通過繪制標準曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計算出樣本中小鼠TNF-α的濃度。